禽蛋中氯霉素类药物残留量测定_老木一支笔专业编制可行性研究分析报告_资金项目立项申请报告

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禽蛋中氯霉素类药物残留量测定

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1　范围
本标准规定了禽蛋中氯霉素类药物残留量检测的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考药物残留量的检测。
2　规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3　原理
试样中的氯霉素类药物残留用乙酸乙酯提取，浓缩后用乙腈复溶，正己烷去脂，高效液相色谱-紫外法测定，外标法定量。
4　试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.1　水，GB/T 6682，一级。
4.2　乙酸乙酯。
4.3　乙腈：色谱纯。
4.4　正己烷。
4.5　流动相：乙腈溶液，乙腈（4.3）+水（4.1）= 20+80。
4.6　0.2 mol/L（pH=10.6）碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液：称取9.32 g无水碳酸钠和1.01 g碳酸氢钠，加水(4.1)溶解，转移至500 mL容量瓶中，定容混匀。
4.7　氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考对照品：含量≥99.0 ％。
4.8　氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准贮备液：精密称取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考对照品10 mg，于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的标准贮备液。-18 ℃保存，有效期为3个月。
4.9　氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准中间溶液：精密量取1 mg/mL氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准贮备液1.0 mL，于100 mL容量瓶中，用流动相稀释，配制成浓度为10 μg/mL的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准中间溶液。2 ℃～8 ℃保存，有效期为1个月。
4.10　氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考混合标准工作液：分别准确移取10 μg/mL氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准贮备液适量，用流动相（4.5）稀释，配制成浓度为20.0 μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考混合标准工作液。现用现配。
5　仪器设备
5.1　高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。
5.2　分析天平：质量0.00001 g。
5.3　天平：质量0.01 g。
5.4　均质器。
5.5　涡旋震荡混合器。
5.6　离心机：5000 r/min以上。
5.7　旋转蒸发仪。
5.8　氮气吹干仪。
5.9　有机微孔滤膜：0.45 µm。
6　样品
6.1　样品的制备
a) 取均质后的供试样品，作为供试试料。
b) 取均质后的空白样品，作为空白试料。
c) 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。
6.2　试料的保存
-18 ℃以下保存。
7　试验步骤
7.1　提取
平行做两份试验，称取（2.00±0.05）g禽蛋均质液，放于50 mL具塞离心管中。准确加入 20 mL乙酸乙酯（4.2），1.00 mL 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液（4.6），涡旋 5 min充分混匀，5000 r/min以上离心 5 min。准确移取10 mL上清液至鸡心瓶中，用旋转蒸发仪50 ℃蒸发至干。残渣用1 mL乙腈（4.3）复溶，同时加入5 mL正己烷（4.4）去脂，涡旋混匀。分取乙腈层，正己烷层复加入1 ml乙腈萃取，分取乙腈层，合并两次乙腈层于同一离心管中，于 50 ℃氮吹至干。用 1.00 mL流动相（4.5）复溶残渣，过 0.45 µm有机微孔滤膜，上机测定。
7.2　高效液相色谱测定
7.2.1　色谱条件
a) 色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，粒径5 µm），或相当者。
b) 检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。
c) 流动相：乙腈+水=20+80。
d) 流速：1.0 mL/min 。
e) 检测波长：氯霉素270 nm，甲砜霉素、氟苯尼考225 nm 。
f) 柱温：25 ℃ 。
g) 进样量：50 µL 。
7.2.2　定量测定
取试样溶液和相应的混合标准工作液分别上机测定，以标准工作液作多点校准进行定量，以峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。标准溶液及试样溶液中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考响应值应在仪器检测的线性范围之内，超出线性范围的则用流动相（4.5）溶液适当稀释后再进样分析。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准溶液色谱图参见附录A。
7.2.3　空白试验
除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
8　试验数据处理
试样中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的含量Xi，以质量分数表示，单位为微克每千克(μg/kg)，按式(1)计算：
(1)
式中：
Xi --------试样中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考含量，μg/kg；
Ci --------试样中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考峰面积对应的浓度，单位为微克每升（g/L）；
V ---------加入提取溶液的体积，单位为毫升（mL）；
V1---------移取上清液的体积，单位为毫升（mL）；
V2--------上机前加入复溶溶液的体积，单位为毫升（mL）；
m----------试料的质量，单位为克（g）。
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
9　检测方法的灵敏度、准确度、重复性
9.1　灵敏度
本标准氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考残留检出限为10 μg/kg，氯霉素、甲砜霉素的定量限为20 μg/kg，氟苯尼考的定量限为30 μg/kg。
9.2　准确度
本方法氯霉素、甲砜霉素在（20～500）μg/kg添加浓度的回收率为80 %～120 %，氟苯尼考在（30～500）μg/kg添加浓度的回收率为80 %～120 %。
9.3　重复性
在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对标准偏差不大于10 %。

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